Tetramery MHC klasy II identyfikują specyficzne dla peptydu ludzkie limfocyty T CD4 + proliferujące w odpowiedzi na antygen grypy A

Specyficzne dla antygenu komórki pomocnicze T obecne w krwi obwodowej przy bardzo niskich częstotliwościach są zdolne do szybkiego ekspansji klonalnej podczas prowokacji antygenem. Wyjątkowa swoistość tej odpowiedzi zapewnia aktywację i ekspansję bardzo wybranej kohorty limfocytów T, cechę, którą wykorzystaliśmy do bezpośredniej identyfikacji i ilościowego oznaczenia komórek pomocniczych T specyficznych wobec epitopu z krwi obwodowej. Rozpuszczalne tetrameryzowane cząsteczki MHC klasy II, obciążone immunodominującym peptydem z hemaglutyniny (HA) i znakowane barwnikami fluorescencyjnymi, skonstruowano i zastosowano do bezpośredniego identyfikowania antygenowo specyficznych komórek T od osobników z grypą. Po 7 dniach proliferacji w odpowiedzi na stymulację przez peptyd HA lub całą szczepionkę przeciwko grypie, komórki barwiące pozytywnie tetramerem HA poddawano od 6 do 9 podziałów i były to CD3 +, CD4 +, CD25 + i CD8a, charakterystyczne dla aktywowanych komórek pomocniczych T odpowiadających na do antygenu. Specyficzny dla epitopu HA składnik złożonej odpowiedzi na całą szczepionkę przeciw grypie stanowił główny podzbiór proliferujących komórek pomocniczych T. Rozpuszczalne tetramery klasy II umożliwiają bezpośrednie podejście do analizy immunodominujących specyficzności antygenowych. Identyfikacja swoistych antygenowo limfocytów T pomocniczych we krwi obwodowej zapewnia środki do śledzenia odpowiedzi immunologicznej przeciwko czynnikom zakaźnym i chorobie autoimmunologicznej. Ten artykuł mógł zostać opublikowany online przed wydaniem drukowanym. Data publikacji dostępna jest na stronie internetowej JCI http://www.jci.org. J. Clin. Invest 104: R63R67 (1999). Wprowadzenie Selektywna ekspansja i aktywacja bardzo małej liczby prekursorowych komórek specyficznych dla antygenu jest niezwykłą i istotną właściwością adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej. Techniki oceny ludzkich odpowiedzi limfocytów T specyficznych dla antygenu są hamowane przez wymaganie specyficzności i czułości potrzebne do wykrycia tak małych kohort reaktywnych komórek. W układach modelowych myszy transgeniczne dla pojedynczych cząsteczek receptora komórek T (TCR) zastosowano z powodzeniem, aby śledzić ewolucję odpowiedzi swoistej dla antygenu i dostarczyły wiele wglądu w mechanizmy ekspansji swoistej wobec antygenu (1. 5). Niemniej jednak podejścia te ograniczają się do badania utrwalonego TCR i nie rozwiązują problemu śledzenia ewolucji repertuaru TCR lub identyfikacji komórek T specyficznych względem antygenu w układach złożonych. Nowatorskie podejścia są szczególnie ważne dla badania ewolucji repertuaru TCR u ludzi, gdzie wzorzec specyficznego dla epitopu rozwoju TCR może determinować odpowiedź na chorobę i ryzyko choroby autoimmunologicznej (6, 7). Ostatnio opracowano kluczowe podejście z zastosowaniem ligandów MHC klasy I do wykrywania komórek T specyficznych dla rozpuszczalnych multimerycznych kompleksów peptyd-MHC (8). W wielu badaniach wykorzystano rozpuszczalne cząsteczki MHC klasy I w identyfikacji, wyliczaniu i fenotypowaniu swoistych antygenowo komórek T CD8 + z krwi obwodowej (9. 11). Jednakże porównywalne badania zależnych od klasy II odpowiedzi limfocytów T CD4 + były nieobecne z powodu trudności w przygotowaniu rozpuszczalnych kompleksów klasy II-peptyd, niskich częstotliwości specyficznych dla antygenu komórek T CD4 + i niskiego międzycząsteczkowego powinowactwa do peptydu MHC. Wiązanie -TCR. Wcześniej Crawford i in. opisali podejście do projektowania cząsteczek klasy II, w których peptyd będący przedmiotem zainteresowania jest kowalencyjnie połączony z łańcuchem a cząsteczki MHC w celu zapewnienia jej umieszczenia w rowku wiążącym peptyd podczas procesu syntezy (12). W ten sposób wytworzono multimery peptydowe-MHC w celu identyfikacji komórek T od myszy transgenicznych dla p /. TCR swoisty dla moth cytochromu c. Ze względu na wprowadzenie transgenu TCR większość komórek T jest związana z tetramerem klasy II w tym układzie. W przeciwieństwie do tego, częstotliwości komórek T specyficznych względem epitopu są istotnie niższe u ludzi, co wymaga systemu znacznie bardziej czułego, aby z powodzeniem śledzić odpowiedzi limfocytów T CD4 +. Limfocyty T CD4 + odgrywają kluczową rolę w inicjowaniu i prowadzeniu rozpoznawania antygenu w większości adaptacyjnych odpowiedzi immunologicznych, jak również w odpowiedzi na szczepionkę i bodźce autoimmunologiczne. Dlatego opracowaliśmy ogólną metodę wykrywania takich komórek za pomocą rozpuszczalnych tetramerów klasy ludzkiej II i opisujemy właściwości specyficznego dla epitopu składnika złożonej odpowiedzi immunologicznej na wirus grypy A. Sposoby Konstruowanie DR0401. Leucyno-zip ., wektory ekspresji biotynylacyjnej. Chimeryczne kasety zawierające regiony kodujące dla suwaka DR / leucyny (LZ) wytworzono stosując technikę nakładania techniką splicingu z udziałem PCR (13,14). W celu wytworzenia rozpuszczalnego łańcucha DRA1, cDNA DRA1 * 0101 amplifikowano w pierwszej rundzie przy użyciu pary starterów (+) 5a -AGAATTCATGGCCATAAGTGGAGTCCC-3. i (.) 5. -CCAGGTCTGCTGACGACTCTGTAGTCTCTGGG-3. (homologia dzieląca się z końcem 5. zasadowej LZ), w stężeniu 4 nM dla każdego startera
[przypisy: peeling kwasem salicylowym, niewydolność nerek objawy, przegladarka skierowań nfz do sanatorium ]
[przypisy: pasta tahini gdzie kupić, soczewki kontaktowe miesięczne, korekcja nosa kwasem hialuronowym ]