sucha beskidzka gabinet stomatologiczny

Pomimo polepszonego naprowadzania i transmigacji powodowanej przez tworzenie funkcjonalnych ligandów E-selektyny, zmodyfikowane FUT6 mRNA transPS hiPS-HSPC nadal wykazywały 5-krotnie niższą skuteczność bazowania BM w porównaniu z komórkami CD34 + mPB (Suplementowa Figura 4, A i B). Aby określić, czy zwiększone naprowadzanie BM zmodyfikowanych komórek było wystarczające do umożliwienia wszczepienia się krwiotwórczego typu, wstrzyknęliśmy kontrolne lub zmodyfikowane FUT6 transfekowane mRNA p hiPS-HSPC myszom NSG. Myszy przeszczepione kontrolnymi transfekowanymi hiPS-HSPC nie wykazały wykrywalnego ludzkiego wszczepu (Figura 3, F i G). Przeciwnie, podgrupa myszy otrzymujących przeszczep transfekowanych mRNA A hiPS-HSPC zmodyfikowanych FUT6 wykazywała niski ludzki chimeryzm we krwi obwodowej w 2 tygodnie po przeszczepie (Figura 3, F i G). Jednak ludzki chimeryzm z czasem zmniejszył się i nie był już wykrywalny 8 tygodni po przeszczepie (Figura 3, F i G). Figura 3 Modyfikowany FUT6 mRNA wzmaga naprowadzanie BM i wynaczynienie ksenotransplantowanych hiPS-HSPC. (A) znakowany barwnikiem FUT6- (DiD, niebieski) lub zmodyfikowany kontrolnie mRNA. Transfekowany (DiI, zielony) hiPS-HSPC zmieszany w stosunku 1: i zobrazowany przed przeszczepem. (B) Rekonstrukcja 3D sekcji calvarium myszy NSG z przeszczepionymi hiPS-HSPC znakowanymi DiD i DiI. Obraz przedstawia widok płaszczyzny strzałkowej, z fragmentem kości cyfrowo usuniętym w celu optymalizacji wizualizacji. Głębokość obrazowania rozciąga się na około 150 .m pod kością. (C) zmodyfikowane FUT6 transfekowane mRNA p hiPS-HSPC wykazywały zwiększone naprowadzanie w 2 godziny po przeszczepie w porównaniu z komórkami transfekowanymi zmodyfikowanymi mRNA a kontrolnymi. n = 3 niezależne eksperymenty (6 myszy). (D) Zdjęcie zrobione 24 godziny po przeszczepieniu, z widocznymi znakami DiD- (niebieskie) i znakowane DiI (zielone) hiPS-HSPC i naczyniami krwionośnymi z etykietą AngioSense (czerwone). Wynaczynione hiPS-HSPC zdefiniowano jako całkowicie odmienne od naczyń krwionośnych. Białe strzałki oznaczają komórki niezwyrażone; żółte strzałki wskazują wynaczynione komórki. (E) Transfekcja mRNA modyfikowana FUT6 zwiększa odsetek homologicznych hiPS-HSPC, które wynaczyły się z naczyń krwionośnych. n = 3 niezależne eksperymenty (5 myszy). (F) Reprezentatywne wykresy FACS pokazujące ludzki chimeryzm w 2 tygodnie po przeszczepie. (G) Przebieg czasowy chimeryzacji krwi obwodowej u myszy NSG otrzymujących przeszczep ludzkich komórek krwi pępowinowej CD34 + i kontrolnych lub zmodyfikowanych FUT6 mRNA transfekowanych hiPS-HPC. Skalowane pręty: 50 .m. Słupki błędów w C i E wskazują SEM. Wartości P w C i E obliczono w teście ucznia. W niniejszym badaniu skupiliśmy się na bazowaniu na BM, wcześniej niesprecyzowanym aspekcie do uzyskania kompetentnych w dziedzinie hiPS-HSPC. Podaje się, że molekularne determinanty wynaczynienia są nienaruszone w hiPS-HSPC, ale hiPS-HSPC wykazują niedobór ekspresji ligandów E-selektyny. Aby przezwyciężyć ten niedobór, opracowaliśmy proste zmodyfikowane podejście oparte na mRNA, w celu tymczasowego zwiększenia liczby ligandów selektyny E na tych komórkach, co skutkuje zwiększonym tetheringiem / zwijaniem in vitro oraz ulepszonym naprowadzaniem i wynaczynieniem z użyciem cibarii in vivo. Przewidujemy, że strategie zwiększania ekspresji ligandu E-selektyny mogą być stosowane jako część wielopłaszczyznowego podejścia do optymalizacji produkcji HSPC z ludzkich PSC. Jako przykład siły glikoinżynierii do egzekwowania ekspresji ligandu E-selektyny ostatnio doniesiono, że fukozylacja ludzkiej krwi pępowinowej za pomocą rekombinowanej fukozylotransferazy przyspiesza wszczepianie w modelach ksenotransplantacyjnych (15, 16), a także dała obiecujące wyniki we wczesnym stadium klinicznym. próby (17). Należy zauważyć, że w tym badaniu zwiększenie zasiedlania i wynaczynienia za pomocą mRNA zmodyfikowanego FUT6 nie było wystarczające do wytworzenia długoterminowych nadających się do przeszczepienia hiPS-HSPC. Dodatkowe braki funkcjonalne (niezwiązane z bazowaniem) prawdopodobnie istnieją i muszą zostać przezwyciężone, zanim można wygenerować w pełni możliwe do sfotografowania HSPC z ludzkich PSC. Jedną obiecującą strategią, którą realizujemy, jest zastosowanie zmodyfikowanego mRNA do przejściowego zwiększenia ekspresji odpowiednich czynników transkrypcyjnych. Ponieważ kilka zmodyfikowanych mRNA kodujących różne białka można wprowadzić jednocześnie (7), kombinatoryczne zmodyfikowane podejście do transfekcji mRNA może być silną strategią do generowania w pełni funkcjonalnych HSPC pochodzących od ludzkich PSC. Co ważne, ponieważ zmodyfikowany mRNA jest niestały i nie integruje się z genomem, jest szczególnie przydatny do zastosowania klinicznego. Podsumowując, zidentyfikowaliśmy niedobór ligandu E-selektyny jako ważny czynnik ograniczający zdolność do bazowania BM hiPS-HSPC i dowodzi, że zmodyfikowana strategia glikoinżynieryjna na bazie mRNA może przezwyciężyć ten niedobór. Co ważne, nasze odkrycia sugerują, że glikoinżynieria wymuszająca ekspresję ligandu E-selektyny może być rozważana w kontekście przyszłych wysiłków skupionych na generowaniu funkcjonalnych HSPC z ludzkich PSC. Metody Szczegóły dotyczące procedur eksperymentalnych podano w Dodatkowych metodach. Statystyka
[patrz też: soczewki kontaktowe miesięczne, sennik samolot katastrofa, rehabilitacja po rekonstrukcji więzadła krzyżowego przedniego ]
[podobne: pasta tahini gdzie kupić, soczewki kontaktowe miesięczne, korekcja nosa kwasem hialuronowym ]