Polimorfizm genu kalpainy-10 jest związany ze zmniejszonym poziomem mRNA w mięśniach i insulinoopornością cd

Przezskórne biopsje mięśnia uzyskano z mięśnia czworogłowego uda po miejscowym znieczuleniu skóry i powięzi 2% lidokainą. Biopsje natychmiast zamrożono w ciekłym azocie i RNA wyekstrahowano przy użyciu zestawu ToTALLY RNA (Ambion, Austin, Texas, USA). CDNA zsyntetyzowano przy użyciu zestawu Advantage RT-for-PCR (CLONTECH Laboratories, Palo Alto, California, USA). Oznaczenie ilościowe mRNA CAPN10 o odwrotnej transkrypcji (i mRNA p-aktyny jako endogennego odniesienia) wykonano jako pomiar w czasie rzeczywistym w systemie ABI PRISM 7700 Sequence Detection System (Applied Biosystems Inc.), zgodnie z instrukcjami producenta. Sekwencje starterów PCR i sondy do wykrywania CAPN10 były następujące: 5. -CACCTACCTGCCGGACACA-3 ., odwrócony: 5. -TGCCATGACGGAGACCTCTT-3 ., i sonda: 5. (Fam) -CAACCAGGATTGACAGGCCATCCATT- (Tamra) p-3. . Ta sonda CAPN10 rozpoznała siedem z ośmiu izoform CAPN10 (wyłączając izoformę g). Sekwencje starterów PCR i sonda do wykrywania p-aktyny były do przodu: 5 (3-TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3 (3, odwrotnie: 5 (3-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3 (3 i sonda: 5 ((Vic) -ATGCCCCCCCCATGCCATCCTGCGT (Tamra) p-3. . Dla każdej sondy i zestawu starterów uzyskano standardową krzywą przez seryjne rozcieńczenie (wykonane w trzech powtórzeniach) cDNA z biopsji mięśnia szkieletowego zdrowego osobnika Pima. Wszystkie próbki przeprowadzono w dwóch powtórzeniach. Dane zostały obliczone przy użyciu metody krzywej standardowej i wyrażone jako stosunek do odniesienia p-aktyny. Analizy statystyczne. Analizy statystyczne przeprowadzono za pomocą systemu analizy statystycznej SAS Institute (Cary, North Carolina, USA). W przypadku zmiennych ciągłych zastosowano procedurę ogólnego równania estymacji (GEE) w celu dostosowania dla zmiennych współzmiennych. wiek, płeć, procent tkanki tłuszczowej, bilans energetyczny, masa beztłuszczowa, masa tkanki tłuszczowej i członkostwo w rodzinie jądrowej, jak wskazano. Stężenie insuliny w osoczu i wskaźniki zniknięcia glukozy podczas infuzji insuliny o niskiej dawce zostały przekształcone w logarytm przed analizą, aby zbliżyć się do rozkładu normalnego. Związek genotypu CAPN10 z cukrzycą oceniano za pomocą analizy tablic kontyngencji. Procedura Mantela-Haenszela została wykorzystana do obliczenia ilorazu szans skorygowanego względem wieku i płci (OR), porównując osoby z genotypem UCSNP-43 G / G z genotypem A / G lub A / A. Wyniki UCSNP-43 ma częstości alleliczne G = 0,62 i A = 0,38 u Indian Pima. Ponieważ dowody na powiązanie w regionie NIDDM1 u meksykańsko-amerykanów można przypisać parom chorego chorego na homozygotę pod względem allelu G wysokiej częstotliwości (3), podobnie analizowano dane dla Indian Pima. Osobniki homozygotyczne pod względem allelu UCSNP-43 G (GG) porównano z osobnikami nie homozygotycznymi pod względem allelu UCSNP-43 G (tj. A / A i G / A). Obie grupy miały podobny wiek (średnia . SE = 26. 1, 27. lat) i procent tkanki tłuszczowej (średnia. SE = 31. dla obu grup). Charakterystykę metaboliczną obu grup porównano po uwzględnieniu wieku, płci, odsetka tkanki tłuszczowej i członkostwa w rodzinie jądrowej, ponieważ wielu z nich było rodzeństwem (tabela 1). Osoby homozygotyczne względem allelu G miały wyższą średnią glikemię na czczo (p = 0,01). W przeciwieństwie do tego, średnia częstość występowania glukozy w wyglądzie lub endogenna produkcja glukozy była niższa w grupie G / G (P = 0,0004). Średnie stężenie insuliny w osoczu 2 godziny po przyjęciu 75 g glukozy było wyższe w grupie G / G (P = 0,05), co wskazuje na insulinooporność. Wyniki badań klamr euglikemicznych potwierdziły to przy niższym średnim wskaźniku usuwania glukozy w grupie G / G podczas wlewu insuliny w niskiej dawce (fizjologicznej) (P = 0,006) i w wysokiej dawce (maksymalnej) w infuzji insuliny (P = 0,05). Niższe tempo usuwania glukozy okazało się być wynikiem mniejszej szybkości utleniania glukozy, ponieważ różnice w utlenianiu węglowodanów były bardziej znaczące (odpowiednio P = 0,04 i P = 0,009 dla infuzji o niskiej i dużej dawce insuliny) niż różnice w nieutleniającym usuwaniu glukozy (odpowiednio P = 0,26 i P = 0,23 w przypadku infuzji insuliny o niskiej i dużej dawce). Różnice w szybkościach utleniania substratu między grupami genotypów obserwowano również w danych z komory oddechowej (tabela 1). Osoby homozygotyczne pod względem allelu G UCSNP-43 utleniały więcej lipidów (P = 0,03) i mniej białka (P = 0,01) w ciągu 24 godzin niż osoby z kombinacjami allelicznymi G / A lub A / A (po skorygowaniu o wiek, płeć, odsetek tkanki tłuszczowej i bilansu energetycznego). Grupa G / G utleniała również mniej węglowodanów, ale ta różnica (P = 0,81) nie osiągnęła istotności statystycznej. Różnice w szybkości utleniania substratu wystąpiły pomimo wszystkich osób spożywających dietę o podobnej zawartości energii i substratu podczas pośrednich pomiarów kalorymetrycznych
[hasła pokrewne: masło z orzechów laskowych, jak ugotowac kasze jaglana, krem z groszku kwestia smaku ]
[podobne: dieta kopenhaska przepis, rehabilitacja po rekonstrukcji więzadła krzyżowego przedniego, przegladarka skierowań nfz do sanatorium ]