Polimorfizm genu kalpainy-10 jest związany ze zmniejszonym poziomem mRNA w mięśniach i insulinoopornością ad

Jeżeli dane dotyczące danej osoby były dostępne w więcej niż jednym badaniu rocznym, tylko dane z pierwszego badania zostały wykorzystane w tych analizach. Analiza asocjacyjna cukrzycy typu 2 (Tabela 2) zawiera dane dotyczące 720 Indian Pima wybranych losowo spośród uczestników naszego ciągłego badania epidemiologicznego (4). Osoby podzielono na grupy według płci i sześciu dekad, a do każdej grupy wybrano 60 osobników do genotypowania. Cukrzycę zdefiniowano zgodnie z kryteriami Światowej Organizacji Zdrowia (10). Tabela Charakterystyka metaboliczna osobników według genotypów UCSNP-43 Tabela 2 Zestawienie genotypów UCSNP-43 z cukrzycą Testy kliniczne. Do stycznia 1996 r. Skład ciała oszacowano za pomocą podwodnego ważenia i metodą absorpcjometrii rentgenowskiej o podwójnej energii (DPX-1, Lunar Radiation Corp., Madison, Wisconsin, USA). Zastosowano równanie konwersji pochodzące z analiz porównawczych, aby oszacowania składu ciała były porównywalne między metodami (11). Doustna tolerancja glukozy była mierzona po 2-3 dniach na diecie utrzymującej wagę mieszanej kompozycji. Badani pacjenci spożyli 75 g glukozy, a krew dla stężenia glukozy i insuliny w osoczu pobrano przed spożyciem glukozy oraz po 30, 60, 120 i 180 minutach. Tolerancja glukozy została sklasyfikowana zgodnie z kryteriami Światowej Organizacji Zdrowia (10). Uczestnicy otrzymywali również 25-dołkowe dożylne wstrzyknięcie glukozy przez 3 minuty w celu zmierzenia ostrej odpowiedzi insulinowej. Próbki krwi pobierano przed infuzją i po 3, 4, 5, 6, 8 i 10 minutach po infuzji w celu określenia stężenia glukozy i insuliny w osoczu. Ostra odpowiedź na insulinę została obliczona jako połowa średniego przyrostu stężenia insuliny w osoczu od 3. 5 minut. W przypadku badań dotyczących poziomu insuliny ustalono zarówno wyjściowy poziom glukozy, jak i stymulowane insuliną wskaźniki zaniku glukozy (wychwytu), jak opisano szczegółowo w innym miejscu (6, 8). Pokrótce, wlewano insulinę, aby uzyskać fizjologiczne i maksymalne stymulujące stężenia insuliny w osoczu (odpowiednio 137 . 3 i 2 394 . 68 U / ml) przez 100 minut na każdym etapie. Stężenie glukozy w osoczu utrzymywano na stałym poziomie około 100 mg / dl w zmiennym wlewie glukozy o stężeniu 20%. Tritowana glukoza była podawana w infuzji przez 2 godziny przed infuzją insuliny, aby obliczyć wskaźniki pozabsorpcyjnych wskaźników pojawiania się glukozy i obliczyć wskaźniki zniknięcia glukozy podczas niższej dawki wlewu insuliny. Kalorymetria pośrednia z wentylowanym kapturem została wykorzystana do oszacowania częstości oksydacji glukozy i lipidów przed iw trakcie infuzji insuliny (7). Wskaźniki pojawiania się glukozy, znikania, utleniania i utleniania lipidów normalizowano do szacowanej wielkości metabolicznej ciała (beztłuszczowej masy + 17,7), jak opisano (6. 8). Pomiar wydatkowania energii i utlenianie substratu w komorze oddechowej opisano wcześniej (11). Pokrótce, ochotnicy wszedł do komory po całonocny post i pozostał w komorze przez 23 godziny. Osobnikom podawano kalorie w celu utrzymania równowagi energetycznej zgodnie z wcześniej ustalonymi równaniami, a szybkość wydatkowania energii mierzono w sposób ciągły, obliczano dla każdego 15-minutowego przedziału w komorze, a następnie ekstrapolowano na 24 godziny (24-EE). Współczynnik przemiany materii został obliczony między 2300 godziną a 0500 godziną jako średnia szybkość metaboliczna wszystkich 15-minutowych okresów, podczas których spontaniczna aktywność fizyczna została wykryta przez radar mniej niż 1,5% czasu. Wytwarzanie dwutlenku węgla (VCO2) i zużycie tlenu (VO2) obliczano dla każdego 15-minutowego okresu. 24-godzinny współczynnik oddechowy (24-RQ) obliczono jako stosunek 24-godzinnego VCO2 i 24-godzinnego VO2. W oparciu o 24-RQ, 24-EE i 24-godzinne wydalanie azotu z moczem, określono 24-godzinne wskaźniki utleniania tłuszczu, węglowodanów i białka (11). Genotypowanie. Genomowy DNA ekstrahowany z limfocytów krwi obwodowej genotypowano dla UCSNP-43 (CAPN10-g.4852G / A) (3) przez sekwencjonowanie fragmentu amplifikowanego metodą PCR. Startery do PCR były naprzód 5. -GCTGGCTGGTGACATCAGTG-3. i odwrócić 5. -TCAGGTTCCATCTTTCTGCCAG-3 .. Przeprowadzono PCR z użyciem 60 ng genomowego DNA w buforze zawierającym 1,5 mM MgCl2, 0,25 mM dNTP i 0,15 jl polimerazy DNA AmpliTaq Gold (Applied Biosystems Inc., Foster City, California, USA). Warunki PCR wynosiły 94 ° C przez 10 minut, a następnie 33 cykle w 94 ° C przez 30 sekund, 60 ° przez 30 sekund i 72 ° przez 30 sekund, a następnie końcowe wydłużanie w 72 ° przez 10 minut. DNA sekwencjonowano za pomocą startera 5a -AGCAGGGTTGGAGCTTGAGAG-3 .. Sekwencjonowanie cyklu DNA przeprowadzono przy użyciu Terminatora Big Dye na automatycznym sekwenatorze DNA (model 377, Applied Biosystems Inc.). Przygotowanie całkowitego RNA z biopsji ludzkich mięśni szkieletowych i ilościowego RT-PCR w czasie rzeczywistym
[podobne: kapelusz słomkowy krzyżówka, korekcja nosa kwasem hialuronowym, dieta kopenhaska przepis ]
[podobne: korekcja nosa kwasem hialuronowym, parafia piotra i pawła w trzebini, stowarzyszenie charytatywne dobrosław ]